p53蛋白和PCNA在胃癌中的表达及临床意义
作者：陈映波 林奕中 张昌卿 吴雪强 周志伟 陈功 万德森 潘志忠
单位：中山医科大学肿瘤医院(广州，510060)
关键词：胃癌；p53蛋白；PCNA
癌症990436
中图分类号：R735.2 文献标识码：A
文章编号：1000-467X(1999)04-0466-01
国内外有关p53蛋白和PCNA与胃癌生物学行为及预后关系报道较多,但尚存在较大争论。本研究旨在进一步明确它们之间的关系。
1 材料和方法
1.1 临床资料
, 百拇医药
本组110例均经病理证实为胃癌。其中70例为石蜡包埋标本,取自1983年～1988年资料完整病例;新鲜标本40例,为1995年～1996年胃癌手术切除标本。其中男57例，女53例；年龄24～73岁，中位年龄46岁；肿瘤部位：胃窦64例，胃体30例，胃底贲门17例，全胃4例；Borrmann分型：I型6例，II型53例，III型40例，Ⅳ型11例；侵犯深度：粘膜及粘膜下层2例，肌层23例，浆膜层74例，浆膜外11例；淋巴结转移：无转移23例，有转移87例；组织分型：分化型腺癌32例，低分化腺癌38例，粘液腺癌14例，印戒细胞癌13例，乳头状腺癌5例，其它8例。
1.2 方法
所有标本切片厚5μm,分别作HE和p53、PCNA单抗LSAB法免疫组化染色。用LSAB免疫组化方法检测癌组织中的p53蛋白、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达情况。抗p53抗体(D0-7)和PCNA抗体(PCIO)购自丹麦DaKO公司。表达强度判断标准分四级,多个高倍视野(×400)计数500个肿瘤细胞,没有阳性细胞为(-),阳性细胞<30%为(+),阳性细胞30～70%为(++),阳性细胞>70%为(+++)。
, http://www.100md.com
1.3 统计方法
多因素线性回归和多因素Cox回归逐步筛选因子法在SPSSforWindows中完成。
2 结果
2.1 估计阳性标准
镜下观察阳性反应于细胞核内显红棕色颗粒为阳性。本组胃癌组织p53蛋白阳性率为47.27%(52/110),PCNA阳性率为95.45%(105/110)。
2.2 统计分析结果
p53蛋白及PCNA分别与下列8个因子筛选分析：性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、侵犯深度、Borrmann分型、组织分型、淋巴结转移。预后则与p53蛋白、PCNA及上述8个因子筛选分析。
多因素线性回归分析结果提示p53蛋白与上述8个胃癌临床病理指标无关。而PCNA关系见表1。
, http://www.100md.com
表1 PCNA与胃癌各临床病理指标多因素线性回归分析结果
非标准系数
标准系数
t值
p值
回归系数(B)
标准误(Std.Error)
标准回归系数(Beta)
肿瘤部位
.191
.095
1.696
, 百拇医药
2.063
.042
胃癌预后多因素Coxl回归分析结果见表2。表2 胃癌预后的多因素Cox回归分析结果 变量
(Variable)
回归系数估计值
(B)
标准误
(S.E)
Wald检测统计量
Wald
自由度
(Df)
, http://www.100md.com
显著性水平
(Sig)
相关系数
(R)
优势比
Exp(B)
PCNA
-.5537
.1505
13.5307
1
.0002
-.1933
, 百拇医药
.5748
侵犯深度
-.5946
.2766
4.6201
1
.0316
-.0922
-5518
Borrmann分型
.9183
.2638
12.1195
, 百拇医药
1
.0005
.1811
2.5050
组织分型
.3841
.1073
12.8157
1
.0003
.1873
1.4683
淋巴结转移
, 百拇医药
-3411
.1587
4.6172
1
.0317
.0921
1.4065
3 讨论
p53基因的发现和研究是分子肿瘤学发展中最动人心的事件之一。野生型p53蛋白半衰期短，而突变型p53蛋白半衰期长，能稳定在较高水平上，故可用免疫组化方法检测突变型p53蛋白。PCNA是在细胞周期S期广泛表达的一种核蛋白。目前研究细胞增殖状态方法有多种，但均有其局限性。本文应用免疫组化链菌素亲生物素过氧化物酶(LSAB)法检测胃癌组织中p53蛋白和PCNA的表达情况，其阳性率分别为47.27%和95.45%,与多数文献[1～3]结果相仿。而且方法简单，结果肯定，可对常规石蜡切片进行回顾性研究。
, http://www.100md.com
p53基因的作用机制目前尚未清楚。国内外学者广泛地研究p53蛋白在多种恶性肿瘤中的表达和意义。目前胃癌组织中p53蛋白的高表达与胃癌生物学行为关系虽有报道，但其意义仍有较多争论。最近IchiyoshiY等[2]报道p53蛋白高表达与淋巴结转移、侵犯深度、肿瘤部位相关。但目前大部分学者[1,3,4,5]认为胃癌组织中p53蛋白的高表达与性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、侵犯深度、组织分型、淋巴结转移和Borrmann分型等无关。本文110例资料多因素线性回归分析结果也未显示p53蛋白高表达与上述胃癌生物学行为指标有关。
PCNA表达阳性说明该细胞正处于增殖状态。近年一些学者发现PCNA表达与某些恶性肿瘤有密切关系。目前虽有少数学者认为其与胃癌生物学行为无关，但多数学者[6～8]都认为PCNA表达指数高者与淋巴结转移、侵犯深度、组织分型有关。我们资料(表1)显示其与肿瘤部位有关，近端肿瘤PCNA指数高于远端肿瘤的PCNA指数(P<0.05)。由此看来，PCNA的表达情况与胃癌生物学行为关系尚有待进一步研究。胃癌的预后与肿瘤侵犯深度、组织分型、淋巴结转移和Borrmann分型有关已为学者接受，本文结果也再次支持这一观点。PCNA是近年发展的原位检测细胞增殖活性的新型探针，表达于细胞周期的G1期，S期达高峰，G2～M期下降，其量的变化与DNA合成一致，能反映细胞的增殖活性。一般认为高表达者肿瘤恶性度高、预后差。本资料多因素Cox回归分析结果(表2)显示PCNA表达指数高者预后差(P<0.05),而p53蛋白高表达与预后无关(P>0.05)。国外学者[4,5,7,8]多支持此观点。作者认为PCNA表达指数可作为判断胃癌预后指标之一。
, http://www.100md.com
致谢：病理科吴秋良副教授、中心实验室冯凯涛老师对本研究给予热情帮助，卫生学院柳青教授为本文进行资料统计分析，特此致谢。
基金项目：广东省卫生厅科研基金资助
参考文献
1 Ioachim E,Goussia A,Stefanou D,et al.Expression of p53 protein in gastric cancer：an immunohistochemical study with correlation to proliferative activity[J] .Anticancer Res， 1997， 17(1A)：513～517.
2 Ichiyoshi Y,Oiwa H,Tomisaki S,et al.Overexpression of p53 is associated with growth pattern and progrosis in advanced gastric cancer [J] . Hepatogastroenterology， 1997， 44(14);546～553.
, 百拇医药
3 Kim JH,Uhm HD,Gong SJ,et al.Relationship between p53 overexpression and gastric cancer prognession[J] . Oncology,1997，54(2)：166～170.
4 Sundblad A,Pellicer EM,Mehta P,et al. Expression of p53 in gastric, carcinoma prognostic value[J] .Medicina (BAires)，1994，54(3)：216～220.
5 Gabbert HE,Muller W , Schneiders A,et al.The relationship of P53 expression to the prognosis of 418 patients with gastric carc.noma [J] .Cancer，1995，76(5)：720
, 百拇医药
6 Iida A, Hirose K, Arai M ,et al. Relationship among the expression of epidermal growth factor receptor ,proliferating cell nuclear antigen labeling index,and lymph node metastasis in gastric cancer[J] . Oncology， 1995， 52(3)：189～195.
7 Shiroko T,Saji S, Kawaguchi Y,et al.A study on the relationship betwen clinicopathological findings of gastric cancer and its biologycal behavior such as DNA ploidy pattern and immunohistochemical staining of PCNA ,laminin, p53 an nm23[J] . Gan-To-Kagaku-Ryoho， 1995， 22(suppl2)：118～123.
8 Yonemura Y, Fonseca L, Tsugawa K,et al.Prediction of lymph node metastasis and prognosis from the assay of the expression of proliferating cell nuclear antigen and DNA ploidy in gastric cancer[J] . Oncology， 1994， 51(3)：251～257.
收稿日期：1998-10-15；修回日期：1999-02-04, 百拇医药
单位：中山医科大学肿瘤医院(广州，510060)
关键词：胃癌；p53蛋白；PCNA
癌症990436
中图分类号：R735.2 文献标识码：A
文章编号：1000-467X(1999)04-0466-01
国内外有关p53蛋白和PCNA与胃癌生物学行为及预后关系报道较多,但尚存在较大争论。本研究旨在进一步明确它们之间的关系。
1 材料和方法
1.1 临床资料
, 百拇医药
本组110例均经病理证实为胃癌。其中70例为石蜡包埋标本,取自1983年～1988年资料完整病例;新鲜标本40例,为1995年～1996年胃癌手术切除标本。其中男57例，女53例；年龄24～73岁，中位年龄46岁；肿瘤部位：胃窦64例，胃体30例，胃底贲门17例，全胃4例；Borrmann分型：I型6例，II型53例，III型40例，Ⅳ型11例；侵犯深度：粘膜及粘膜下层2例，肌层23例，浆膜层74例，浆膜外11例；淋巴结转移：无转移23例，有转移87例；组织分型：分化型腺癌32例，低分化腺癌38例，粘液腺癌14例，印戒细胞癌13例，乳头状腺癌5例，其它8例。
1.2 方法
所有标本切片厚5μm,分别作HE和p53、PCNA单抗LSAB法免疫组化染色。用LSAB免疫组化方法检测癌组织中的p53蛋白、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达情况。抗p53抗体(D0-7)和PCNA抗体(PCIO)购自丹麦DaKO公司。表达强度判断标准分四级,多个高倍视野(×400)计数500个肿瘤细胞,没有阳性细胞为(-),阳性细胞<30%为(+),阳性细胞30～70%为(++),阳性细胞>70%为(+++)。
, http://www.100md.com
1.3 统计方法
多因素线性回归和多因素Cox回归逐步筛选因子法在SPSSforWindows中完成。
2 结果
2.1 估计阳性标准
镜下观察阳性反应于细胞核内显红棕色颗粒为阳性。本组胃癌组织p53蛋白阳性率为47.27%(52/110),PCNA阳性率为95.45%(105/110)。
2.2 统计分析结果
p53蛋白及PCNA分别与下列8个因子筛选分析：性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、侵犯深度、Borrmann分型、组织分型、淋巴结转移。预后则与p53蛋白、PCNA及上述8个因子筛选分析。
多因素线性回归分析结果提示p53蛋白与上述8个胃癌临床病理指标无关。而PCNA关系见表1。
, http://www.100md.com
表1 PCNA与胃癌各临床病理指标多因素线性回归分析结果
非标准系数
标准系数
t值
p值
回归系数(B)
标准误(Std.Error)
标准回归系数(Beta)
肿瘤部位
.191
.095
1.696
, 百拇医药
2.063
.042
胃癌预后多因素Coxl回归分析结果见表2。表2 胃癌预后的多因素Cox回归分析结果 变量
(Variable)
回归系数估计值
(B)
标准误
(S.E)
Wald检测统计量
Wald
自由度
(Df)
, http://www.100md.com
显著性水平
(Sig)
相关系数
(R)
优势比
Exp(B)
PCNA
-.5537
.1505
13.5307
1
.0002
-.1933
, 百拇医药
.5748
侵犯深度
-.5946
.2766
4.6201
1
.0316
-.0922
-5518
Borrmann分型
.9183
.2638
12.1195
, 百拇医药
1
.0005
.1811
2.5050
组织分型
.3841
.1073
12.8157
1
.0003
.1873
1.4683
淋巴结转移
, 百拇医药
-3411
.1587
4.6172
1
.0317
.0921
1.4065
3 讨论
p53基因的发现和研究是分子肿瘤学发展中最动人心的事件之一。野生型p53蛋白半衰期短，而突变型p53蛋白半衰期长，能稳定在较高水平上，故可用免疫组化方法检测突变型p53蛋白。PCNA是在细胞周期S期广泛表达的一种核蛋白。目前研究细胞增殖状态方法有多种，但均有其局限性。本文应用免疫组化链菌素亲生物素过氧化物酶(LSAB)法检测胃癌组织中p53蛋白和PCNA的表达情况，其阳性率分别为47.27%和95.45%,与多数文献[1～3]结果相仿。而且方法简单，结果肯定，可对常规石蜡切片进行回顾性研究。
, http://www.100md.com
p53基因的作用机制目前尚未清楚。国内外学者广泛地研究p53蛋白在多种恶性肿瘤中的表达和意义。目前胃癌组织中p53蛋白的高表达与胃癌生物学行为关系虽有报道，但其意义仍有较多争论。最近IchiyoshiY等[2]报道p53蛋白高表达与淋巴结转移、侵犯深度、肿瘤部位相关。但目前大部分学者[1,3,4,5]认为胃癌组织中p53蛋白的高表达与性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、侵犯深度、组织分型、淋巴结转移和Borrmann分型等无关。本文110例资料多因素线性回归分析结果也未显示p53蛋白高表达与上述胃癌生物学行为指标有关。
PCNA表达阳性说明该细胞正处于增殖状态。近年一些学者发现PCNA表达与某些恶性肿瘤有密切关系。目前虽有少数学者认为其与胃癌生物学行为无关，但多数学者[6～8]都认为PCNA表达指数高者与淋巴结转移、侵犯深度、组织分型有关。我们资料(表1)显示其与肿瘤部位有关，近端肿瘤PCNA指数高于远端肿瘤的PCNA指数(P<0.05)。由此看来，PCNA的表达情况与胃癌生物学行为关系尚有待进一步研究。胃癌的预后与肿瘤侵犯深度、组织分型、淋巴结转移和Borrmann分型有关已为学者接受，本文结果也再次支持这一观点。PCNA是近年发展的原位检测细胞增殖活性的新型探针，表达于细胞周期的G1期，S期达高峰，G2～M期下降，其量的变化与DNA合成一致，能反映细胞的增殖活性。一般认为高表达者肿瘤恶性度高、预后差。本资料多因素Cox回归分析结果(表2)显示PCNA表达指数高者预后差(P<0.05),而p53蛋白高表达与预后无关(P>0.05)。国外学者[4,5,7,8]多支持此观点。作者认为PCNA表达指数可作为判断胃癌预后指标之一。
, http://www.100md.com
致谢：病理科吴秋良副教授、中心实验室冯凯涛老师对本研究给予热情帮助，卫生学院柳青教授为本文进行资料统计分析，特此致谢。
基金项目：广东省卫生厅科研基金资助
参考文献
1 Ioachim E,Goussia A,Stefanou D,et al.Expression of p53 protein in gastric cancer：an immunohistochemical study with correlation to proliferative activity[J] .Anticancer Res， 1997， 17(1A)：513～517.
2 Ichiyoshi Y,Oiwa H,Tomisaki S,et al.Overexpression of p53 is associated with growth pattern and progrosis in advanced gastric cancer [J] . Hepatogastroenterology， 1997， 44(14);546～553.
, 百拇医药
3 Kim JH,Uhm HD,Gong SJ,et al.Relationship between p53 overexpression and gastric cancer prognession[J] . Oncology,1997，54(2)：166～170.
4 Sundblad A,Pellicer EM,Mehta P,et al. Expression of p53 in gastric, carcinoma prognostic value[J] .Medicina (BAires)，1994，54(3)：216～220.
5 Gabbert HE,Muller W , Schneiders A,et al.The relationship of P53 expression to the prognosis of 418 patients with gastric carc.noma [J] .Cancer，1995，76(5)：720
, 百拇医药
6 Iida A, Hirose K, Arai M ,et al. Relationship among the expression of epidermal growth factor receptor ,proliferating cell nuclear antigen labeling index,and lymph node metastasis in gastric cancer[J] . Oncology， 1995， 52(3)：189～195.
7 Shiroko T,Saji S, Kawaguchi Y,et al.A study on the relationship betwen clinicopathological findings of gastric cancer and its biologycal behavior such as DNA ploidy pattern and immunohistochemical staining of PCNA ,laminin, p53 an nm23[J] . Gan-To-Kagaku-Ryoho， 1995， 22(suppl2)：118～123.
8 Yonemura Y, Fonseca L, Tsugawa K,et al.Prediction of lymph node metastasis and prognosis from the assay of the expression of proliferating cell nuclear antigen and DNA ploidy in gastric cancer[J] . Oncology， 1994， 51(3)：251～257.
收稿日期：1998-10-15；修回日期：1999-02-04, 百拇医药